PNA寡核苷酸處理方案

1.PNA具有較高的親和力和特異性。

2.富含嘌呤的PNA低聚物的溶解度降低，并傾向于聚集。建議低聚物的嘌呤含量低于50%，在PNA夾中一個(gè)低聚物的嘌呤（特別是G堿段不超過6段），因?yàn)樗苄苑浅Ｖ匾？梢蕴砑觾蓚€(gè)賴氨酸來提高長PNA或具有高嘌呤的PNA的溶解度。

存儲(chǔ) 和 處理

1.PNA作為凍干粉（超過5年）或作為水中溶液（至少一年）儲(chǔ)存起來非常穩(wěn)定-20°或更低。對(duì)于長期存儲(chǔ)，-70°

2.當(dāng)準(zhǔn)備使用時(shí)，向下旋轉(zhuǎn)試管，將50n摩爾的PNA溶解在1 ml無菌水中，制成50 uM的原液。渦旋和混合良好，以

實(shí)現(xiàn)*全溶解。

3.平均分配和儲(chǔ)存在-20°或-70°工作原液可以進(jìn)一步稀釋10倍（5毫米，10倍），并在4度下保存幾周。

4.當(dāng)PNA解凍時(shí)，加熱至55°中浸泡5分鐘，以實(shí)現(xiàn)*全溶解。

PCR 反應(yīng)

*下面是一個(gè)例子。實(shí)際情況可能根據(jù)序列而變化，需要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來確定。

1.準(zhǔn)備以下PCR混合。

a.25 ul 2x PCR混合物

b.FW和RV PCR引物分別為最終0.2 uM

c.5 ul PNA鉗夾（5 uM庫存）至最終0.5uM（范圍：0.2~5 uM）

d.DNA模板： 20 ng（10~50 ng）

e.水至50 ul

2.按如下方法運(yùn)行PCR程序。

a.變性：94度 3 min

b.放大(22~40循環(huán)）

i.變性：94度 30 sec

ii.PNA夾具：65~75度為20秒（比PNA工具計(jì)算的Tm低5~10度）

iii.底漆退火：55~65度為20秒

iv.擴(kuò)展：68度為30秒

c.擴(kuò)展：72度, 10 min

d.保持在4度

3.取5ulPCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上運(yùn)行。

4.夾緊反應(yīng)中最常見的PNA濃度為0.4~2 uM。一般來說，如果溶解度不受影響，更高濃度的PNA可以提供更好的夾緊效果。